ELISA s lošim rezultatom?Pratite nas kako biste odabrali pravi Elisa tanjur.
Odabir prikladne ELISA ploče prvi je korak za uspješan ELISA eksperiment, ali mnogi ljudi to zanemaruju. Kad ljudi rade pokuse, često uzimaju u obzir samo pokus, ali ne znaju da proizvod često ima veliki utjecaj na pokus. Pravilan odabir proizvoda pridonijet će uspjehu eksperimenta. Obično uzimamo u obzir sljedeće čimbenike kada provodimo ELISA pokuse:
1. Oblik dna
Trenutačno proizvođači dizajniraju jažice označene enzimima kao neovisne kolone i na odgovarajući način povećavaju udaljenost između jažica tako da se mogu neovisno odvojiti, čime se smanjuje unakrsna kontaminacija. Različite vrste Elisa ploča imaju različite oblike dna bunara. Evo nekih uobičajenih oblika dna rupa:
Ravno dno: Dno je vodoravno, naziva se i F dno. Svjetlost se neće odbijati kroz dno, koje može u najvećoj mjeri propuštati svjetlost. Koristite za pokuse koji zahtijevaju okruglo dno zbog vidljivosti ili drugih razloga.
Okruglo dno: Također poznato kao U-dno, pruža najbolje rezultate čišćenja i hibridne performanse, pogodno za primjene koje trebaju testiranje sedimenata.
C-dno: može pružiti dobar učinak čišćenja između ravnog dna i okruglog dna, istovremeno kombinirajući prednosti ravnog dna.
Konusno dno: poznato i kao V-dno, pogodno je za precizno uzorkovanje i pohranjivanje mikro uzoraka za optimalno dobivanje malih volumena.
2. Boja Elisa tanjura
Postoje tri boje Elisa ploče: prozirna, crna i bijela.
Većina ELISA odabire prozirne ploče kao eksperimentalni materijal. Bijele i crne Elisa ploče općenito se koriste za detekciju luminescencije. Sama crna ELISA ploča apsorbira svjetlost, pa je njen signal slabiji od signala bijele ELISA ploče. Crne Elisa ploče općenito se koriste za detekciju jačeg svjetla, kao što je detekcija fluorescencije; naprotiv, bijele Elisa ploče mogu se koristiti za slabiju detekciju svjetla, a često se koriste za opću kemiluminiscenciju i razvoj boje supstrata (kao što je dualna luciferaza). analiza reporterskog gena).
3. Materijal Elisa ploče
Uobičajeni materijali su polietilen (PE), polipropilen (PP), polistiren (PS), polivinil klorid (PVC) i polikarbonat (PC).
Materijali koji se najčešće koriste u ELSIA-i su polistiren i polivinil klorid. Polivinilkloridna meka ploča je tanka, može se rezati, a cijena je niska. Nedostatak je što završna obrada nije tako dobra kao polistirenska ploča, a dno rupe nije ravno kao polistiren. No odgovarajuća pozadinska vrijednost također će se povećati. Obično se tretman ionskim presađivanjem provodi na površini ELISA ploče, a aktivne funkcionalne skupine kao što su aldehidne skupine, amino skupine i epoksi skupine uvode se u površinu polimera kako bi se poboljšala učinkovitost površine supstrata.
4. različiti mehanizmi vezivanja
Učinkovito vezanje materijala za oblaganje na donju površinu ploče ključni je korak u ELISA testu. Stoga, strukturne karakteristike i kemijska svojstva tvari koju treba premazati treba pažljivo analizirati prije eksperimenta kako bi se odabrala odgovarajuća Elisa ploča. Općenito govoreći, postoji nekoliko načina vezanja materijala za oblaganje na dno ploče: pasivna adsorpcija, kovalentno vezanje i hvatanje afiniteta.
Pasivna adsorpcija: mehanizam pasivne adsorpcije je složen, a veza između materijala premaza i dna ploče uglavnom se oslanja na međumolekularne sile (van der Waalsova sila) i vodikove veze. U većini ELISA testova, vezanje tvari za oblaganje na dno ploče postiže se pasivnom adsorpcijom. Općenito, vezanje između antigena (ili antitijela) srednje i velike molekularne težine i dna ploče postiže se pasivnom adsorpcijom. Hidrofobne/hidrofilne karakteristike donje površine ploče često se uzimaju u obzir pri odabiru Elisa ploče. Sljedeća tablica navodi opseg primjene i upotrebu različitih hidrofilnih površina supstrata:
hidrofilni | Prioritetno vezanje | Glavna upotreba |
- | Molekule koje sadrže značajne hidrofobne regije, kao što su: lipidi, lipoproteini, veliki proteini | Antigen ELISA, FlA, LIA |
plus | Biomolekule s hidrofilnim/hidrofobnim svojstvima kao što su: srednji do veliki proteini, imunoglobulini, albumin | Double Antibody Sandwich ELISA, Antigen ELISA |
plus plus | Biomolekule s hidrofilnim/hidrofobnim svojstvima kao što su: mali do veliki proteini, imunoglobulini, albumin, LPS, fosforilirani proteini, glikoproteini | Dvostruka antitijela ELISA, FIA, LIA |
plus plus plus | Glikoproteini, polarne lipidne molekule, fosfolipidi, kardiolipidi | Antigen ELISA |
Hvatanje afiniteta: Hvatanje afiniteta temelji se na specifičnom vezanju označenih makromolekula na njihove odgovarajuće receptore. Označene makromolekule mogu se dobiti ili kemijskim spajanjem ili genetskim inženjeringom.
Značajke Affinity Capture su:
1.visoka specifičnost
2. Može poboljšati omjer signala i šuma rezultata mjerenja
Češće površine dna bunara su: površina obložena streptavidinom (streptavidin); površina obložena nikl kelatom (Nickel Chelate) i površina obložena glutationom (Glutation, GSH).
3. Površina streptavidina: Visoki afinitet i specifičnost streptavidina i biotina koriste se za postizanje vezanja donje ploče na obloženi protein.
4. Površina kelata nikla: kelat nikla pričvršćen je na površinu polimera kako bi vezao fuzijske proteine s His (histidin) oznakama.
5. Površina glutationa: Upotreba specifičnosti enzima i supstrata između glutationa i glutation sulfhidriltransferaze (GST) kako bi se postiglo vezanje donje ploče na protein ovojnice.
Zašto odabrati BKMAM Elisa tanjur?
Izrađen od 100 posto polistirenskog materijala,
Prikladno za adherentnu kulturu stanica,
Ravna baza, jednake debljine i jednake veličine za reakcijske stupove,
Sterilno sa pojedinačnim pakiranjem,
Visoka kvaliteta uz tvorničku cijenu.
