Osnovni uvjeti za kulturu stanica
1. Odgovarajući medij za kulturu stanica
Odgovarajući medij stanične kulture jedan je od najvažnijih uvjeta za rast i proliferaciju stanica in vitro. Medij kulture ne samo da osigurava staničnu prehranu i osnovne tvari za poticanje rasta i proliferacije stanica, već također osigurava životno okruženje za rast i reprodukciju kultiviranih stanica.
2. Serum visoke kvalitete
Trenutno većina sintetičkih podloga zahtijeva dodatak seruma. Serum je jedna od najvažnijih komponenti u mediju stanične kulture, koji sadrži različite čimbenike rasta i druge hranjive tvari potrebne za rast stanica.
3. Konstantna temperatura rasta stanica
Kako bi se održao snažan rast uzgojenih stanica, mora postojati stalna i odgovarajuća temperatura.
4. Prikladno plinsko okruženje
Plin je jedan od nužnih uvjeta za opstanak stanica sisavaca, a potrebni plinovi su uglavnom kisik i ugljikov dioksid.
5. Temperatura kulture stanica
Kako bi se održao snažan rast uzgojenih stanica, mora postojati stalna i odgovarajuća temperatura. Različite vrste stanica imaju različite zahtjeve za temperaturu kulture. Standardna temperatura za kulturu ljudskih stanica je 36,5 stupnjeva ± 0.5 stupnjeva. Odstupanje od ovog temperaturnog raspona utjecat će na normalan metabolizam stanica, pa čak i umrijeti.
6. Prikladno plinsko okruženje
Plin je jedan od nužnih uvjeta za opstanak kulture stanica sisavaca, a potrebni plinovi su uglavnom kisik i ugljikov dioksid. Kisik sudjeluje u ciklusu trikarboksilne kiseline, stvarajući energiju za rast i proliferaciju stanica te sintetizirajući različite komponente potrebne za rast stanica.
Uobičajena kontaminacija stanične kulture
1. Bakterijska kontaminacija
Bakterijska kontaminacija je najčešća. Jednom kada je operacija malo nepravilna, uzrokovat će kontaminaciju stanica. Nakon bakterijske kontaminacije, izgledat će kao crne tanke trake pijeska kada se promatra pod mikroskopom. Štapićastog oblika, itd. Drugo, medij za kulturu postaje žut i zamućen, a fini sedimenti u obliku pijeska mogu se jasno vidjeti u petrijevoj zdjelici, a s vremena na vrijeme postoji i čudan miris.
2. Kontaminacija gljivicama
Otopina kulture kontaminirane gljivicama bistra je i prozirna, nije poput velikog izbijanja bakterijske infekcije, pa ju je teško rano otkriti. Ponekad pod mikroskopom izgleda poput niti, ponekad poput koralja, a polako će rasti vrlo tanka crna nit. Kada je prekasno, stanice se teško mogu spasiti.
3. Kontaminacija plijesni
U skladu s gljivičnim infekcijama, budući da je medij kulture bistar, gljivičnu kontaminaciju teško je otkriti rano, kada je često prekasno. Flokulentne nečistoće polagano su se pojavljivale u mediju kulture, a pod mikroskopom su se mogli vidjeti plutajući objekti vlaknaste mase, poput mačića na vjetru. Stanice i dalje mogu rasti, ali s vremenom stanice propadaju i prestaju rasti.
4. Infekcija mikoplazmom
Medij kulture postaje mutan. Nakon što mikoplazma inficira stanice, citopatske promjene nisu očite, ali se stanje stanice pogoršava i rast usporava. Pod mikroskopom mogu biti male crne točkice, ali medij kulture općenito nije zamućen. Nakon pasaže stanica pojavile su se međustanične crne mrlje, stanice su vakuolizirane, a mnoge stanice podsjećale su na apoptozu i nekrozu. Na kraju su stanice plutale i potpuno umrle.
Sprječavanje kontaminacije stanica
Uspostava dobrih pravila i propisa može znatno doprinijeti smanjenju kontaminacije stanica. Uključujući sustav pristupa, radne norme i sustav dnevnog upravljanja.
Sustav pristupa: uključujući osoblje i materijale. Osoblje treba biti obučeno prije nego što može samostalno raditi, a prije ulaska u laboratorij mora zadovoljiti zahtjeve nošenja, kao što su bijele kute, ogrtači za izolaciju, maske, rukavice, itd. Za potrebne predmete, predmeti za jednokratnu upotrebu trebaju biti striktno sterilizirati i sterilizirati, a kupljene artikle potrebno je kupovati iz redovnih i pouzdanih kanala. Novokupljene ćelije treba testirati i provjeriti prije uporabe.
Operativne specifikacije: Najbolje je formulirati specifikacije za rutinske operacije, a laboratorijsko osoblje mora slijediti operativne specifikacije, koje se ne mogu mijenjati po želji, te također njegovati dobre radne navike za laboratorijsko osoblje. Na primjer, nakon što se vrh pipete usiše, neće se produžiti u medij drugi put, a dovoljna količina medija bit će usisana jednom. Prilikom dodavanja tekućine, tekućinu treba dodati u suspenziji što je više moguće, što može učinkovito spriječiti kontaminaciju mikoplazmom i unakrsnu kontaminaciju stanica. Osim toga, ako je moguće, radite samo s jednom staničnom linijom odjednom, a bolje je imati mali vremenski razmak između stanica kako biste izbjegli unakrsnu kontaminaciju.
Sustav dnevnog upravljanja: uključuje pravila i metode za korištenje, čišćenje i održavanje okoliša i potrošnog materijala, reagensa itd. Tu je i upravljanje potrošnjom, inventarom i nabavom reagensa i potrošnog materijala, uključujući dvorazinsko upravljanje inventarom uzorci stanica. Za izvore kontaminacije koje nije lako pronaći, najbolje je provoditi redovita testiranja, uglavnom na kontaminaciju mikoplazmom i unakrsnu kontaminaciju stanica.
BKMAM Bio osigurava odgovarajuće potrošne materijale za kulturu stanica:
Jednokratne plastične okrugle/kvadratne Petrijeve zdjelice:
Polistirenski materijal visoke prozirnosti (PS);
Površina je glatka i ravna, te nema optičke distorzije stanica pod mikroskopom;
Dizajn slaganja olakšava slaganje i skladištenje;
Sterilizacija etilen oksidom (EO);
Otpornost na habanje i koroziju.
Adhezivna obrada posuda za kulturu stanica:
Polistirenski materijal (PS);
Sterilizacija elektronskim snopom, bez pirogena, bez toksina;
Obrada površine vakuumskom plazmom, izvrsno prianjanje stanica;
Površina je glatka i ravna, te nema optičke distorzije stanica pod mikroskopom;
Dizajn koji se može složiti olakšava slaganje i skladištenje.
Plastične ploče za kulturu stanica:
Polistirenski materijal (PS);
Prikladno za normalnu staničnu kulturu, vrsta ploče za liječenje koja ne prianja;
Bez pirogena, bez toksina, sterilizirano;
Neovisno pakiranje koje se lako kida, jednostavno za rukovanje;
Adhezivna obrada ploča za kulturu stanica:
Polistirenski materijal (PS);
Adherentni tretman (TC tretman) tip ploče, pogodan za kulturu adherentnih stanica;
Bez pirogena, bez toksina, sterilizirano;
Neovisno pakiranje koje se lako kida, jednostavno za rukovanje;
Svi imaju ravno dno.
Adhezivna obrada boca sa staničnom kulturom:
Polistirenski materijal (PS);
Sterilizacija elektronskim snopom, bez pirogena, bez toksina;
Obrada površine vakuumskom plazmom, izvrsno prianjanje stanica;
Prozračna navlaka, koja pogoduje izmjeni plinova i sprječava prolaz mikroorganizama.
Krioviale s unutarnjom/vanjskom vrtnjom:
100 posto čisti polipropilenski materijal (PP);
Može izdržati sterilizaciju od 15 psi, 121 stupanj;
Stijenka cijevi je zadebljana, a tijelo cijevi ima skalu i područje za pisanje;
Postoji silikonska prstenasta brtva između navoja poklopca cijevi i tijela cijevi kako bi se osigurala nepropusnost;
Bez DNaze, bez RNaze, bez pirogena, bez endotoksina.
