Mikrobiološko znanje koje želite
Mikroorganizmi su skupina sićušnih organizama koji postoje široko rasprostranjeni u prirodi i nevidljivi su golim okom te se moraju povećati stotinama, tisućama ili čak desecima tisuća puta uz pomoć optičkog mikroskopa ili elektronskog mikroskopa. Njihove prednosti su mala veličina, jednostavna struktura, brza reprodukcija, laka varijacija i snažna sposobnost prilagodbe okolini.
Klasifikacija mikroorganizama:
Postoji mnogo vrsta mikroorganizama, najmanje više od 100000 vrsta. Prema strukturi, kemijskom sastavu i životnim navikama te drugim razlikama mogu se podijeliti u tri kategorije.
Jezgra eukariotske mikrobne stanice ima viši stupanj diferencijacije, uključujući nuklearnu membranu, nukleolus i kromosome; citoplazma ima kompletne organele (kao što su endoplazmatski retikulum, ribosom i mitohondrij itd.). Ovoj vrsti mikroorganizama pripadaju gljive.
Prokariotske mikrobne stanice imaju nizak stupanj jezgrene diferencijacije, samo primitivnu nukleoplazmu, bez jezgrene membrane i jezgrice; organele nisu baš kompletne. Postoje mnoge vrste takvih mikroorganizama, uključujući bakterije, spirohete, mikoplazme, rikecije, klamidije i aktinomicete.
Acelularni mikroorganizmi nemaju tipičnu staničnu strukturu niti enzimski sustav za stvaranje energije, te mogu rasti i razmnožavati se samo u živim stanicama. Ovoj vrsti mikroorganizama pripadaju virusi.
Odvajanje i pročišćavanje mikroorganizama
Mikrobna kultura koja sadrži više od jedne vrste naziva se mješovita kultura. Ako su sve stanice u koloniji izvedene iz jedne roditeljske stanice, tada se kolonija naziva čistom kulturom. U identifikaciji bakterijskih vrsta općenito se zahtijeva da korišteni mikroorganizmi budu čiste kulture. Proces dobivanja čiste kulture naziva se separacija i pročišćavanje, a postoje mnoge metode.
1. Metoda izlivene ploče
Najprije se mikrobna suspenzija razrijedi u nizu, a određena količina razrjeđenja potpuno se pomiješa s otopljenim hranjivim agar medijem koji se održava na oko 40-50 stupnjeva, a zatim se smjesa izlije u sterilnu petrijevu zdjelicu. Nakon skrućivanja, ploča je inkubirana naopako u konstantnoj komori. Pojedinačna stanica se umnožava da bi se formirala kolonija, jedna kolonija se uzima da se napravi suspenzija, a gornji koraci se ponavljaju nekoliko puta da se dobije čista kultura.
2. Metoda premazivanja ravne ploče
Najprije se mikrobna suspenzija pravilno razrijedi, te se određena količina razrjeđenja stavi na sterilnu pločicu hranjivog agara koja se skrutila, a potom se sterilnom staklenom lopaticom ravnomjerno rasporedi po površini medija. Pojedinačna kolonija može se dobiti inkubacijom na konstantnoj temperaturi.
3. Metoda scribiranja ploče
Najlakši način izolacije mikroorganizama je crtanje. Nanesite malu količinu kulture na ploču pomoću sterilne petlje. Postoje mnoge metode pisanja. Uobičajene metode crtanja za koje je vjerojatnije da će se pojaviti jedna kolonija su metoda kose crte, metoda krivulje, metoda kvadrata, metoda zračenja i metoda četiri mreže. Kada se inokulacijska petlja pomiče unatrag po površini medija, bakterijska tekućina na inokulacijskoj petlji postupno se razrjeđuje i na kraju se jedna stanica raspršuje na nacrtanoj liniji. Nakon uzgoja svaka stanica prerasta u koloniju.
4. Metoda obogaćene kulture
Metoda i princip metode kulture obogaćivanja vrlo su jednostavni. Možemo stvoriti uvjete koji omogućuju samo željenim mikrobima da rastu, a pod tim uvjetima željeni mikrobi mogu se učinkovito natjecati s drugim mikrobima i daleko premašiti druge mikrobe u smislu sposobnosti rasta. Ako se neki obligatni paraziti žele izolirati, uzorci se moraju inokulirati u odgovarajuće osjetljive populacije stanica domaćina kako bi rasle u velikom broju. Čiste parazitske bakterije mogu se dobiti ponovljenim sijanjem.
5. Anaerobna metoda
U laboratoriju, kako bi se izolirale neke anaerobne bakterije, epruveta koja sadrži izvorni medij može se koristiti kao posuda za kulturu, a epruveta se može zagrijavati u kipućoj vodenoj kupelji nekoliko minuta kako bi se istisnuo otopljeni kisik u mediju. . Zatim se brzo ohladi i inokulira. Nakon inokulacije, sterilni parafin dodan je na površinu medija kako bi se medij izolirao od zraka. Druga metoda je zamijeniti plin u mediju s N2 ili CO2 nakon inokulacije, a zatim zatvoriti otvor epruvete iznad plamena. Ponekad se radi učinkovitije izolacije nekih anaerobnih bakterija izolirani uzorak može inokulirati na podlogu, a zatim se petrijeva zdjelica može staviti u potpuno zatvoreni uređaj za anaerobnu kulturu.
6. Metoda izolacije jedne stanice (ili jedne spore).
Za izravnu izolaciju pojedinačnih stanica ili pojedinačnih jedinki iz miješanih populacija za kulturu radi dobivanja čiste kulture potrebno je koristiti metodu mikroseparacije. Za veće mikroorganizme, jedna jedinka može se ekstrahirati pomoću kapilare. Za mikroorganizme s relativno malim jedinkama potreban je mikromanipulator za odabiranje pojedinačnih mikrobnih stanica ili spora pomoću kapilare ili mikroiglice, kuke, petlje itd. pod mikroskopom kako bi se dobila čista kultura. Metoda odvajanja jedne ćelije ima relativno visoke zahtjeve na tehnologiju rada.
Mikrobna kultura
1. Prema tome je li kisik potreban tijekom kulture, može se podijeliti u dvije kategorije: aerobna kultura i anaerobna kultura.
Aerobna kultura: poznata i kao "aerobna kultura". Naime, kada se ovaj mikroorganizam uzgaja, potrebno mu je dodati kisik, inače neće dobro rasti. U laboratoriju se kose kulture dobivaju dobivanjem sterilnog zraka izvana kroz pamučne čepove. Većina tekuće kulture u Erlenmeyerovoj tikvici se mućka mućkalicom, tako da vanjski zrak može neprestano ulaziti u bocu.
Anaerobna kultura: Također poznata kao "anaerobna kultura". Takvim mikroorganizmima nije potreban kisik za sudjelovanje u uzgoju. U procesu uzgoja anaerobnih mikroorganizama najvažnija točka je uklanjanje kisika iz medija.
2. Prema fizičkom stanju medija, može se podijeliti u dvije kategorije: čvrsta kultura i tekuća kultura.
Čvrsta kultura: To je metoda inokulacije sojeva u rahlu čvrstu podlogu bogatu hranjivim tvarima i uzgoj mikroorganizama u odgovarajućim uvjetima.
Tekuća kultura: U eksperimentima, tekuća kultura može potaknuti mikroorganizme da se brzo množe i dobiti veliki broj kultura. Pod određenim uvjetima, to je također učinkovita metoda za mikroorganizme da selektiraju i obogaćuju bakterije.
BKMAM biotech osigurava odgovarajući laboratorijski potrošni materijal za mikrobnu kulturu:
Jednokratne plastične okrugle/kvadratne Petrijeve zdjelice:
l Polistirenski materijal (PS) visoke prozirnosti;
lPovršina je glatka i ravna, i nema optičke distorzije stanica pod mikroskopom;
l Dizajn slaganja olakšava slaganje i skladištenje;
l Sterilizacija etilen oksidom (EO);
l Otpornost na habanje i koroziju.
Jednokratni plastični štapić/petlja za cijepljenje:
Polistirenski materijal (PS);
Protiv zagađenja, bez endotoksina, DNaze, RNaze i pirogena;
Samostalno pakiranje je sterilizirano;
Fina izrada i kompletne specifikacije;
Plastični rasipač stanica za jednokratnu upotrebu, rasipač bakterija:
Polistirenski materijal (PS);
Protiv zagađenja, bez endotoksina, DNaze, RNaze i pirogena;
Dizajn u obliku slova L, jednostavan za korištenje;
Za jednokratnu upotrebu, lagan i praktičan.
Nehrđajući čelik/jednokratne sterilne ploče s specifikacijama:
Pločica sa specifikacijama od nehrđajućeg čelika izrađena je od nehrđajućeg čelika, a jednokratna pločica sa specifikacijama izrađena je od polipropilena (PP) za hranu.
Protiv zagađenja, bez endotoksina, DNaze, RNaze i pirogena;
Područje razmazivanja je strogo standardizirano
Jedna strana pločice sa specifikacijama opremljena je ručkom kojom se lako rukuje
Sterilno zatvoreno pojedinačno pakiranje kako bi se izbjegla sekundarna kontaminacija uzorkovanja i pogreške u rezultatima
Jednokratna uporaba kako bi se izbjegla unakrsna kontaminacija i smanjilo radno opterećenje
Dobrodošli na suradnju s nama
Iskreno
Michael Peng
michael@bkmbio.com