Prijatelji koji provode pokuse povezane sa stanicama moraju često koristiti metode zamrzavanja stanica. Ukratko, zamrznuto skladištenje stanica je spremanje stanica u okruženju niske temperature kako bi se postigla svrha dugoročnog očuvanja. Stanice će imati određeni stupanj mutacije tijekom procesa prijenosa. Kako bi se osiguralo da se stanice i dalje mogu koristiti u slučaju onečišćenja i mutacije stanica, neke se stanice obično koriste za zamrzavanje.
Princip zamrznute ćelije
Jedan princip u procesu zamrzavanja i oporavka stanica je "sporo zamrznuto stapanje" kako bi se maksimalno sačuvala vitalnost stanica. Jednostavno rečeno, mora se sporo zamrzavati i hladiti, a mora se brzo zagrijavati kada se oporavi od niske temperature. Razlog za sporo smrzavanje je taj što ako se stanice stave izravno u okolinu ultra niske temperature kao što je tekući dušik, stanice formiraju veliki kristal leda, koji će oštetiti stanice.
Ako ga polagano zamrzavate, stanice mogu polagano dehidrirati kako bi se postigla svrha zaštite stanica. Osim toga, prilikom oporavka također se sprječava da mali kristali leda tvore velike kristale leda, odnosno teške kristale ledenih kristala. Stoga, kada svi obično rade zamrzavanje stanica, to uvijek uzrokuje gubitke stanica, što će vjerojatno imati utjecaja na korak zamrzavanja.
Nekoliko metoda zamrzavanja stanica
Ručna metoda: Zamrznute stanice obično se pohranjuju u tekućem dušiku. Metoda ručnog rada je hlađenje gradijenta u hladnjaku. Spremite stanice u zamrznutu epruvetu za pohranu i stavite ih u hladnjak na 4 stupnja C, -20 stupnjeva C, -80 stupnjeva C redom. Zamrznuto 24 sata na -80 stupnjeva C prije prijenosa u tekući dušik. Ručno hlađenje ne zahtijeva dodatnu dopunu ostalih potrošnih materijala. Može se ručno upravljati. Najjednostavniji je, ali nije jednostavan. Stvarna operacija je problematična. A učinak nije baš dobar, jer ova metoda hlađenja još uvijek nije ujednačena i nije nužno primjenjiva za osjetljivije ćelije.
Gradijentna rashladna kutija: Gradijentna rashladna kutija koja se prodaje na tržištu posebno se koristi za ravnomjerno hlađenje procesa zamrzavanja. Brzina hlađenja je obično -1 stupanj/minuta. Stavite smrznutu cijev za pohranjivanje u kutiju za gradijent hlađenja i postavite kutiju za gradijent za hlađenje izravno u hladnjak na -80 stupnjeva C kako biste proveli noć bez ručnog rada gradijenta. Zatim spustite depozitnu cijev i stavite je u tekući dušik. Učinak korištenja gradijentnih rashladnih kutija je bolji, jer komercijalne rashladne kutije na tržištu mogu osigurati otprilike ujednačenu brzinu hlađenja.
Na tržištu postoje dvije uobičajene gradijentne rashladne kutije. Potreba za dodavanjem izopropila, obično kućište PC kutije. Kada se koristi, dodavanje izopenola u liniju za skaliranje u kutiji kada se koristi. Izopropanol se koristi kao nosač za skladištenje i distribuciju topline.
Drugu vrstu nije potrebno dodavati s izopropilom, pjenjenjem, a zamrzivač se može staviti izravno tijekom upotrebe, što je praktičnije za rad.
Kutiju za hlađenje izopropanola preporuča se zamijeniti tekućinom nakon što se koristi nekoliko puta, ali budući da je izopropanol štetna tekućina, koja uzrokuje štetu pokusima i okolišu, obično se može koristiti nekoliko puta. Međutim, potrebno je osigurati da tekućina bude u određenoj količini.
Neprogramirano skladištenje u zamrzivaču: Koristite neprogramirano smrznute tekućine koje se mogu kupiti na tržištu. U usporedbi s tradicionalnom smrznutom tekućinom, unutarnja komponenta može smanjiti oštećenje stanica kristala leda, tako da nema potrebe za korištenjem gradijenta za hlađenje, niti je potrebna kutija za hlađenje s gradijentom. Zamrznuto skladištenje može se staviti izravno u hladnjak na -80 stupnjeva C.
Mnogi uzorci stanica su vrlo dragocjeni. Osim nas, moramo ga koristiti i pri izvođenju pokusa. Također morate birati dobre proizvode što je više moguće u srodnom izboru proizvoda. Odaberite zamrznutu epruvetu za pohranu kvalificirane kvalitete, pokušajte koristiti alat za gradijentno hlađenje za zamrzavanje i maksimalno povećajte jamstvo niskog oštećenja stanica kako biste izbjegli male gubitke zbog manjih.